Em 2009,[5] cinco anos após os acontecimentos de Resident Evil 4, Chris Redfield, um ex-membro do Serviço de Resgate e Táticas Especiais (S.T.A.R.S.) e agora parte da Aliança de Avaliação de Segurança em Bioterrorismo (BSAA), é despachado para Kijuju, na África. Ele e sua nova parceira Sheva Alomar têm a tarefa de apreender Ricardo Irving antes que ele venda uma arma bio-orgânica no mercado negro. Quando eles chegam, descobrem que os moradores foram infectados por parasitas que são chamados de "Las Plagas" (já os infectados são chamados de "Majini") e os membros do time alfa da BSAA foram mortos. Chris e Sheva são resgatados pela equipe delta da organização, que conta com Josh Stone, o mentor de Sheva. Nos dados providenciados por este, Chris vê uma fotografia de Jill Valentine, sua antiga parceira, que é dada como morta após um confronto com Albert Wesker. Chris, Sheva e a equipe delta se aproximam de Irving, mas ele escapa com a ajuda de uma figura encapuzada. Irving deixa documentos que levam Chris e Sheva para campos petrolíferos pantanosos. Este lugar é onde a negociação de Irving estava prestes a acontecer, mas logo descobrem que isso era uma distração criada por ele. Quando a dupla tenta se reagrupar com o time delta, eles descobrem que todos foram mortos por uma arma bio-orgânica; Sheva não consegue encontrar Josh entre os mortos. Determinado a saber se Jill ainda está viva, Chris não relata o incidente para a sede.[6]
Entrando no pântano, eles encontram Josh ferido, mas seguro, e rastreiam o barco de Irving com sua ajuda. Ele injeta-se com uma variante do Las Plagas e se transforma em uma besta enorme parecida com um polvo.Chris e Sheva o matam e suas últimas palavras levam-os para uma caverna próxima para saber mais. A caverna é a fonte de uma flor utilizada para criar o vírus progenitor, que levou a produção dos vírus T e G, e tem sido usada para formar uma nova estirpe extremamente poderosa chamada Uroboros. Os dois encontram evidências de que a Tricell, a empresa que financia a BSAA, assumiu um antigo laboratório subterrâneo da Umbrella Corporation e continuou sua pesquisa. Na instalação, eles descobrem que há milhares de cápsulas com cobaias humanas. Embora Chris ache que uma delas é de Valentine, ela está vazia. Quando eles saem, descobrem que a diretora executiva da Tricell, Excella Gionne, conspirava com Wesker para lançar mísseis com o vírus Uroboros em todo o mundo; é revelado eventualmente que Wesker espera salvar alguns poucos escolhidos do caos da infecção para governá-los, criando uma nova raça humana. Chris e Sheva perseguem Excella, mas são interrompidos por Wesker e a figura encapuzada, que se revela ser Jill, que está sendo escravizada por um dispositivo de controle mental preso em seu peito. Excella e Wesker escapam em um navio petroleiro da Tricell, enquanto Chris e Sheva lutam contra Jill e conseguem remover o dispositivo de controle. Depois de uma breve conversa, Jill pede para Chris seguir Wesker.[6]
A dupla embarca no navio petroleiro e encontram Excella, que escapa e deixa cair uma mala de seringas, que são guardadas por Sheva. Quando os dois alcançam o convés principal, Wesker anuncia através de um intercomunicador que ele traiu e infectou Excella com o Uroboros. Ela se transforma em um monstro gigante, que é morto por Chris e Sheva. Jill entra em contato e diz que Wesker deve tomar doses precisas e regulares de um vírus para manter a sua força e velocidade; uma dose maior ou menor iria envenená-lo. Sheva percebe que as seringas de Excella são doses da droga. Eles então seguem Wesker em um bombardeiro carregado com mísseis contendo o Uroboros, injetando-o com as seringas. Wesker tenta escapar no avião, mas é impedido, fazendo-o cair em um vulcão. Furioso, Wesker se expõe ao vírus e persegue Chris e Sheva pelo vulcão. Eles lutam contra ele até serem resgatados por um helicóptero pilotado por Jill e Josh. Já enfraquecido, Wesker tenta arrastar o veículo para dentro do vulcão, mas Chris e Sheva disparam dois tiros de lança-mísseis, matando-o.[7] Na cena final do jogo, Chris pergunta a si mesmo se vale a pena lutar pelo mundo. Olhando para Sheva e Jill, ele decide viver em um mundo sem medo.[6]
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